1892年，美國(guó)病理學(xué)家W.H.韋爾奇等最早分離到產(chǎn)氣莢膜梭菌，因而又稱韋氏梭菌或魏氏梭菌。該菌廣泛存在于土壤、人和動(dòng)物的腸道中，其致病性主要是由其所產(chǎn)生的外毒素引起的。
在生產(chǎn)中，由魏氏梭菌引起產(chǎn)房仔豬紅痢的案例多有報(bào)道，但引起哺乳仔豬猝死的案例尚不多見(jiàn)。近日，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室診斷工作，確診一例由A型魏氏梭菌病誘發(fā)哺乳仔豬猝死癥的案例，現(xiàn)報(bào)告如下：
一、發(fā)病情況
南陽(yáng)地區(qū)桐柏縣某養(yǎng)豬場(chǎng)，成立于2000年左右，規(guī)模為300頭種豬，年出欄6000頭商品育肥豬左右。于2017年12月22日，養(yǎng)殖廠長(zhǎng)向筆者反映，一晚上產(chǎn)房不同窩中出現(xiàn)急性死亡8頭5～7日齡哺乳仔豬，因?yàn)樗劳鍪前l(fā)生于夜間，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)死前癥狀。另在其它窩中，發(fā)現(xiàn)四頭精神不振，體溫正常，但腹圍增大、俯臥時(shí)四肢向腹部緊緊靠攏的疑似病豬。哺乳母豬臨床表現(xiàn)健康，食欲旺盛，未發(fā)現(xiàn)異常。
二、診斷方法
1.病理剖檢
病死豬外表可見(jiàn)腹圍膨大，發(fā)紺，柔軟，小腹部皮下水腫。打開(kāi)腹腔后，發(fā)現(xiàn)大量腸道內(nèi)容物充滿整個(gè)腹腔，腥臭味嚴(yán)重。剖檢消化系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)結(jié)腸處有一處破裂，腸內(nèi)內(nèi)容物均系此處流入腹腔。死亡8頭哺乳仔豬，剖檢癥狀均有結(jié)腸破裂這種現(xiàn)象，其他器官未見(jiàn)典型病變。
根據(jù)臨床和剖檢癥狀，無(wú)法判斷疾病發(fā)生根本原因。繼續(xù)剖檢臨床上腹圍膨大的活體哺乳仔豬，外表可見(jiàn)輕度消瘦，腹圍增大，精神稍差，神智清醒，打開(kāi)腹腔后，發(fā)現(xiàn)小腸鼓氣，結(jié)腸部位靠腸系膜側(cè)嚴(yán)重不規(guī)則充血，內(nèi)容物鮮黃。
2.形態(tài)與染色鏡檢
無(wú)菌分別取心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)及小腸等臟器組織涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，并逐一鏡檢。記錄鏡檢結(jié)果。
3.細(xì)菌分離培養(yǎng)
取病死豬胃、腸內(nèi)容物適量接種于普通肉湯培養(yǎng)基中，37℃搖床培養(yǎng)24 h。同時(shí)，將上述內(nèi)臟樣本勻漿后用少量滅菌生理鹽水制成懸液，將組織懸液樣本分別接種于普通瓊脂平板和血瓊脂平板上，分別37℃常規(guī)及厭氧培養(yǎng)24 h。僅在厭氧培養(yǎng)結(jié)果中發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長(zhǎng),挑取單個(gè)菌落轉(zhuǎn)種于厭氧增菌培養(yǎng)基中，37℃增菌培養(yǎng)24 h。
厭氧增菌培養(yǎng)基、需氧增菌培養(yǎng)基、血瓊脂平板、葡萄糖血瓊脂平板購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司。普通肉湯培養(yǎng)基、肉肝湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基購(gòu)自杭州天和微生物制劑有限公司。產(chǎn)氣莢膜梭菌A型、B型、C型、D型4種分型血清購(gòu)自新疆生物制品廠。
4.細(xì)菌的致病性試驗(yàn)
取12只20g左右健康的小白鼠，分成2組。第1組6只，將37℃培養(yǎng)24 h的純培養(yǎng)物肉湯培養(yǎng)液分別腹腔注射接種，每只0.12 ml；第2組6只，每只接種0.12 mL滅菌肉湯作為對(duì)照。
5.細(xì)菌的鑒定
觸(涂)片、染色、鏡檢:取肝、脾、腎、胃、腸病料及純培養(yǎng)物按常規(guī)方法制成觸(涂)片，革蘭氏及瑞氏染色后鏡檢。生化試驗(yàn)：按常規(guī)方法進(jìn)行生理生化特性鑒定。
6.血清型鑒定
將純培養(yǎng)物接種于厭氣肉肝湯中37℃培養(yǎng)8 h，培養(yǎng)物2000 r/min離心30 min。分別取上清液1 mL與等量的A、B、C、D 4種分型血清混合，37℃作用45 min，每一個(gè)血清型分別靜脈注射小白鼠2只，0.14 mL /只，觀察24 h，根據(jù)結(jié)果確定分離菌血清型。
三、結(jié)果
1.細(xì)菌的分離與培養(yǎng)特性
該菌為嚴(yán)格厭氧菌。將肝、腸道內(nèi)容物等直接涂片瑞氏染色，可見(jiàn)大量?jī)啥蒜g圓的粗大桿菌，獨(dú)立或成雙排列，短鏈較少，無(wú)鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。革蘭氏染色陽(yáng)性。有的菌體中央或近端有芽孢，芽孢小于菌體橫徑。在血瓊脂平板上可形成莢膜，無(wú)芽孢。在葡萄糖血瓊脂平板上形成圓形、光滑、隆起、淡黃色、直徑2~4 mm的菌落，有的呈圓盤(pán)形,邊緣成鋸齒狀。菌落周?chē)凶厣苎獏^(qū)，呈輻射狀條紋。牛乳培養(yǎng)基中培養(yǎng)10 h后，,牛乳被酸凝，凝塊呈多孔的海綿狀。肉肝湯培養(yǎng)變得渾濁并產(chǎn)生大量氣體。
2.生化試驗(yàn)
生化試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1
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葡萄糖 |
麥芽糖 |
乳糖 |
蔗糖 |
鼠李糖 |
果糖 |
棉子糖 |
甘露醇 |
肌醇 |
水楊苷 |
牛乳發(fā)酵 |
明膠液化 |
卵磷脂酶 |
H2S |
溶血試驗(yàn) |
硝酸鹽還原 |
吲哚 |
| 分離菌 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
— |
+ |
— |
+ |
+ |
+ |
+ |
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— |
3.致病性試驗(yàn)結(jié)果
注射純培養(yǎng)物肉湯培養(yǎng)液的試驗(yàn)組小鼠均死亡，注射滅菌肉湯的對(duì)照組小鼠均存活。
4.血清學(xué)分型鑒定結(jié)果
注射等量純培養(yǎng)物懸液與A型血清混合物的小白鼠正常存活，而其他小白鼠全部死亡。說(shuō)明A型血清中的抗體被特異性中和，由此可以確定該豬場(chǎng)的病原應(yīng)該是A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。
四、小結(jié)和討論
經(jīng)對(duì)分離菌株進(jìn)行厭氧培養(yǎng)、生化鑒定、動(dòng)物接種、血清型鑒定,同時(shí)結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀觀察、病理剖檢等措施,確定該豬場(chǎng)產(chǎn)房仔豬猝死的原因是感染A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。產(chǎn)氣莢膜梭菌可分為A、B、C、D、E和F 6個(gè)血清型，其中A型和C型是導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)生疾病的主要病原。產(chǎn)氣莢膜梭菌對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的危害貫穿豬的整個(gè)一生，可引起乳豬的紅痢、梭菌性仔豬腹瀉、中大豬及母豬的脹氣、壞死性腸炎及猝死。
A型產(chǎn)氣莢膜梭菌是豬腸內(nèi)正常微生物區(qū)系的一部分，但是它也可引起新生仔豬的腸道疾病。當(dāng)產(chǎn)氣莢膜梭菌或其芽孢被豬采食后在腸道內(nèi)大量增殖，或當(dāng)采食飼料過(guò)多而滯留于胃腸內(nèi)，消化道蠕動(dòng)不足，飼料、氣候及環(huán)境的突變導(dǎo)致豬只抵抗力下降，腸道菌群失調(diào)，使腸道內(nèi)原有的產(chǎn)氣莢膜梭菌大量繁殖而發(fā)病。產(chǎn)氣莢膜梭菌繁殖后，產(chǎn)生大量氣體，不能及時(shí)從肛門(mén)排出，使胃腸鼓脹，壓迫心臟和肺部，導(dǎo)致血液循環(huán)和呼吸系統(tǒng)功能障礙，最終導(dǎo)致豬窒息死亡。
發(fā)病場(chǎng)作為一個(gè)運(yùn)行17年的老豬場(chǎng)，生產(chǎn)設(shè)備已趨于老化，環(huán)境清潔衛(wèi)生及消毒工作存在漏洞。加之近年來(lái)受行情影響，生產(chǎn)效益下滑，母豬淘汰減緩，部分高胎次母豬可能攜帶有A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。哺乳期間，發(fā)病仔豬機(jī)會(huì)性獲得母體的病原菌，導(dǎo)致此次臨床病情發(fā)生。
抗生素只對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌本身起作用，對(duì)其釋放的毒素?zé)o任何作用，采用有效合理的預(yù)防措施的意義大于治療。本病發(fā)生與環(huán)境衛(wèi)生有直接關(guān)系，故豬舍糞便應(yīng)及時(shí)清理，欄舍定期消毒。合理配置日糧，保證飼料原材料質(zhì)量，禁用霉變飼料或突然更換飼料。豬場(chǎng)若常爆發(fā)此病，可在冬春季節(jié)，在飼料中添加甲硝唑200g/噸，連喂3-5天?？善鸬捷^好預(yù)防效果。在母豬產(chǎn)前和產(chǎn)后半個(gè)月內(nèi)飼料中添加酸化劑和微生態(tài)制劑，可有效緩解母豬便秘和梭菌在體內(nèi)過(guò)度增殖，起到對(duì)仔豬安全保護(hù)作用。
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